Culturability of rat bone marrow stromal cells and evaluation for osteoblastic formation

Abstract

Objectives: We investigated culturability of bone marrow stromal cells of young mature rats and evaluated cultured cells with regard to histomorphologic features and osteoblastic formation.\nMethods: Sixteen mature Wistar rats were sacrificed under high dose of ether anesthesia. Their femurs and tibias were removed, medullas and metaphyses were washed with carrier serum and the collected material was cultured in DME/F12 serum. The cells in the test medium and at the bottom of Petri dishes were studied under inverted microscope and were photographed. Then, the cells at the bottom were stained with the picro-thionin technique, examined under light microscope, and photographed. Following trypsinizing, cluster cells were dissolved and smears were prepared for histomorphologic evaluation of stromal cells. \nResults: Rat bone marrow cells in the culture showed a high percentage of reproducibility (93.8%; 15/16). The stromal cells in Petri dishes were of different morphology, and were interspersed with large multinucleated osteoblast-like cells following staining with the picro-thionin technique.\nConclusion: Our findings favor the opinion that cells harvested in bone marrow cell culture are very similar to osteoblastic cells and that they may stem from osteoprogenitor cells which have multifacet differention ability.

Özet

Amaç: Bu çalışmada, genç yetişkin sıçan kemik iliği stromal hücrelerinin kültüre edilebilirliği ve kültür hücrelerinin genel histomorfolojik ve osteoblastik formasyon yönünden değerlendirilmesi amaçlandı.\nÇalışma planı: Yüksek doz eter ile yaşamları sonlandırılan 16 adet 2.5 aylık Wistar cinsi genç erkek sıçanın arka femur ve tibiaları çıkarıldı, metafiz ve medullaları taşıyıcı serumla yıkandı ve toplanan aspirat DME/F12 serumuyla kültüre edildi. Kültür flasklarında medium içindeki ve tabandaki hücreler, fotoğraf ataçmanlı invert mikroskopla incelenerek görüntülendi. Pikro-tionin boyama tekniğiyle boyanan flask tabanındaki hücreler ışık mikroskobuyla incelenerek resimleri çekildi. Yapışık kültür hücreleri tripsinize edilerek çözüldü ve yayma preparatlar hazırlanarak stromal hücrelerin genel histomorfolojik yapıları incelendi.\nSonuçlar: Sıçan kemik iliği hücrelerinin kültürde üreme yüzdesi %93.8 (15/16) oranında yüksek bulundu. Kültür flasklarında, zamanla birbirine yapışarak çoğalan farklı morfolojide stromal hücreler ve aralarında pikro-tionin ile boyanan çok nükleoluslu büyük çekirdekli osteoblastlara benzeyen hücreler saptandı.\nÇıkarımlar: Bulgularımız, kemik iliği hücre kültürlerinde, elde edilen hücrelerin osteoblastlara çok benzediği ve bu hücrelerin çok yönlü farklılaşma yeteneği olan osteoprogenitör hücrelerden köken alabileceği öngörüsünü desteklemektedir.